凝膠色譜柱清洗方法

凝膠色譜柱清洗方法

親水性乙烯基樹(shù)脂基質(zhì)蛋白分離用色譜柱，除了可選用鍵合了離子交換基團(tuán)的離子交換柱外，還可選用疏水反應(yīng)、親和等其他多種類型的柱子。這些類型的色譜柱，其充填介質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性好，不易發(fā)生由于官能基脫落而導(dǎo)致樣品組分洗脫位置變化的現(xiàn)象。盡管如此，由于柱子的反復(fù)使用，在長(zhǎng)時(shí)間使用后，樣品組分的洗脫情況還是會(huì)發(fā)生改變的。其原因與樣品中極微量的附吸物在柱中的蓄積有關(guān)。特別由于生物樣品組分復(fù)雜，這種吸附現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。（非特異性吸附）當(dāng)觀察到這樣的現(xiàn)象后，應(yīng)使用合適的溶劑將蓄積的吸附物質(zhì)去除，以恢復(fù)柱子的性能。

1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液（ABA-5PW柱不適用）測(cè)定狀態(tài)下，用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通過(guò)樣品進(jìn)樣閥清洗數(shù)次（3-5回）。2、20-40% 醋酸水溶液與上述NaOH水溶液的清洗方法相同。3、在淋洗液中添加水溶性有機(jī)溶劑（疏水性吸附物質(zhì)的去除）在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有機(jī)溶劑（濃度《20%）進(jìn)行過(guò)柱清洗。（注意鹽的析出）4、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑（難溶性蛋白的去除）在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性劑（Triton、Tween、Brij等）后進(jìn)行過(guò)柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。

通常情況下，使用方法1和2便可將吸附物質(zhì)去除。如果方法1和2不能恢復(fù)柱效，則可使用方法3和4。注意，在附吸成分其吸附力極強(qiáng)時(shí)，即使進(jìn)行過(guò)清洗，柱性能也有可能得不到恢復(fù)