酶聯免疫試劑盒正確操作步驟

酶聯免疫試劑盒正確操作步驟

酶聯免疫試劑盒，即ELISA，是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA(酶聯免疫吸附試驗）法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。酶聯免疫試劑盒操作步驟：1． 確定檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。3． 酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。4． 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。5． 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應，反應過程中，要經常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有 明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應最長不要超過30分鐘）。10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。11． 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。